本文適用于檢測肉制品人工合成色素：檸檬黃、日落黃、胭脂紅、誘惑紅、亮藍、赤蘚紅、新紅、莧菜紅。
一、 方法原理
待測樣品經石油醚（沸程30~60 ℃）除油，揮去樣品吸附的石油醚后，樣品中的人工合成色素（檸檬黃、日落黃、胭脂紅、誘惑紅、亮藍、赤蘚紅、新紅、莧菜紅）用乙醇：氨水：水（7:2:1）溶液提取。
提取液經蛋白沉淀劑除蛋白，離心后上清液于80 ℃水浴上蒸至近干，用少量水復溶，復溶液經正己烷除油，經SPE凈化，采用高效液相色譜儀-二級管陣列檢測器檢測，通過色譜峰的保留時間和掃描光譜圖進行定性，外標法定量。
二、試樣制備
去除肉制品中的骨頭等不可食用部分后，采用粉碎機將其粉碎。
注意事項
試樣制備還要根據檢驗檢測工作的具體目的來確定采樣部位
若樣品中合成色素含量較高，建議提取時采用均質器進一步粉碎樣品以便提取完全。
三、 試樣保存
粉碎后的樣品于4 ℃保存。
注意事項
試樣粉碎后建議盡快取樣測試，因4 ℃長時間保存肉制品，肉制品也會變質；若-18 ℃保存可延長樣品保存期限，但樣品中的水分會有損失，不能代表原樣品。
四、 試樣提取
稱取粉碎后的樣品5.00 g于50 mL離心管，加入10 mL石油醚（30-60），渦旋混合30 s，5000 r/min離心5 min，傾去上清液，向殘渣中再加入10 mL石油醚（30-60），重復上述操作2次，將樣品置于通風櫥中揮去剩余的石油醚，待提取。
向殘渣中加入10 mL乙醇：氨水：水（7:2:1）溶液，渦旋混合30 s，5000 r/min離心10 min，將上清液轉移至另一離心管中，向殘渣中再加入10 mL乙醇：氨水：水（7:2:1）溶液，重復上述操作2次，合并上清液；向上清液中加入亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液各3 mL，渦旋混合后靜置20 min，8000 r/min離心10 min，將上清液于80 ℃水浴上蒸至近干，用3 mL水復溶，加入1 mL正己烷，渦旋混合，5000 r/min離心3 min，去除正己烷層，待凈化。
將復溶溶液倒入3 cm高的聚酰胺粉小柱（預先采用6 mL甲醇、水依次活化，pH=5的水洗至流出液pH值在5左右），用6 mL水、甲醇依次淋洗小柱，待淋洗液流干，用6 mL乙醇：氨水：水（7:2:1）溶液洗脫，收集洗脫液，并于氮吹儀上吹至近干，用水復溶并定容至5 mL，過0.22 μm水性濾膜待測。
注意事項
若樣品中人工合成色素含量較高，應增加提取次數，并采用均質器配合進行提取，以便將樣品中的人工合成色素提取完全
對于高蛋白高脂肪的樣品，檢測過程中需根據蛋白和脂肪的含量對蛋白沉淀劑和正己烷的加入量和除雜次數進行調整
加入蛋白沉淀劑后靜置20 min以便于樣品中的蛋白沉淀完全
聚酰胺粉小柱活化后，流出液的pH值要達到5附近，以保證人工合成色素能全部吸附在小柱上，沒有損失
過濾復溶溶液時一定要用水性濾膜，因有機濾膜對人工合成色素有截留效果，在使用水性濾膜時也要注意觀察有沒有截留
五、檢測
1、標準曲線的配制：精密移取適量的人工合成色素標準溶液，用水稀釋，配制成線性范圍合適的混合標準曲線。
注意事項：
1）購買標準品時建議直接選擇液態的標準溶液，省去固體標準物質稱量、溶解帶來的不便和誤差
2）標準曲線的線性范圍根據待測樣品溶液中待測組分的含量而定，以降低標準曲線擬合引入的不確定度。
2、樣品溶液的檢測：按照同標準溶液檢測相同的儀器條件進行。因新紅、檸檬黃和莧菜紅3種人工合成色素在液相色譜中不易分開，將我實驗室摸索的液相分離條件提供如下，供大家參考。
色譜柱：TechMate C18，5μm，4.6×250 mm，流速：1.0 mL/min；
梯度洗脫條件
時間 min
甲醇 %
20 mmol/L乙酸銨溶液 %
0
10
90
17.5
13
87
21.5
70
30
22
95
5
23
95
5
25
10
90
35
10
90
注意事項
檢測波長建議大家采用各人工合成色素的最大吸收波長，如檸檬黃采用428 nm檢測
檢測器建議采用二極管陣列檢測器，盡管采用最大吸收波長檢測，但還會有出現假陽性的風險，若采用二極管陣列檢測器進行檢測，同時對光譜進行掃描，通過光譜圖進一步定性，以避免發出假陽性報告
結尾的話：
不可超量使用添加劑，不可添加違規添加劑。
作者簡介：Joufe，2010年畢業于東北大學分析化學專業，在國家級核心期刊發表論文近20篇，參加省級、國家級科研課題研究7項，現主要從事食品、保健食品的理化檢測方法及新技術的研究工作。自工作以來一直從事食品檢驗檢測及方法開發工作，如有食品檢驗檢測或方法研究等同食品相關的需求，可以隨時聯系：joufe@126.com
