操作步驟： 本實驗方法適用于從 1-10ml 過夜培養的大腸桿菌菌液中提取質 粒。提取量受菌株、質粒拷貝數、菌液體積和培養時間、培養基類型 等因素的綜合影響
1. 收菌：將過夜培養（37℃，12-16 小時）的菌液于室溫≧10,000g 離心 1-2 分鐘，徹底棄除上清。注意：高拷貝質粒建議使用≦5ml 菌液；菌液用量過大不僅不能增加質粒產 量， 反而會因裂解不完全或雜質封閉硅膠膜而降低產量；培養時間不宜過長， 否則會增加開環結構質粒的比例。
2. 重懸：加入 250μl 含 RNase A 的細胞懸浮液（S1） ，充分混懸震蕩 或用槍頭反復抽打使細菌徹底分散懸浮
3. 裂解：加入 250μl 細胞裂解液（S2） ，輕輕上下顛倒混合 5 次，室 溫靜置 1-5 分鐘，待細菌充分裂解，溶液變半透明。
注意：避免劇烈震蕩導致基因組 DNA 裂解，裂解時間不能超過 5 分鐘。
4. 中和：加入 350μl 中和緩沖液（S3） ，輕輕上下顛倒混合 5 次，充 分混勻，避免劇烈震蕩。室溫下≧12,000g 離心 10 分鐘。
5. DNA 結合：小心吸取上清，轉移到插入收集管的離心吸附柱內，室 溫下≧12,000g 離心 1 分鐘，棄除收集管中的廢液，將離心吸附柱 重新插回收集管中。
6. 清洗：加入 500μl 漂洗液 （WB,請確認已加入乙醇！ ）于離心吸附 柱中，室溫下≧12,000g 離心 30 秒，棄除收集管中的廢液，將離 心吸附柱重新插回收集管中。
7. 再次清洗：加入 500μl 漂洗液 （WB）于離心吸附柱中，室溫下≧ 12,000g 離心 30 秒，棄除收集管中的廢液，將離心吸附柱重新插回收集管中。將離心吸附柱開蓋再次離心 2 分鐘，徹底除去殘余 漂洗液。
8. 洗脫：小心取出離心吸附柱，將其套入一個新的 1.5ml 滅菌離心 管中。向硅膠吸附膜的中央加入 100μl 洗脫緩沖液（EB） ，室溫放 置 1 分鐘后，≧12,000g 離心 1 分鐘收集質粒 DNA。
注意：為提高質粒濃度，最低可使用 30μl 的 EB 溶液，離心收集后殼將洗脫 的質粒溶液再次加入離心吸附柱中重復洗脫；使用 100μ
