你遇到過嗎？
今天化驗結果出來了，25羥基維生素D2偏低，大夫讓打針，有沒有一樣的寶寶？這種情況必須要打針嗎還是吃藥也可以？
25-羥基維生素D2、25-羥基維生素D3是哈？
維生素D(vitamin D)是一類脂溶性維生素，屬固醇類衍生物，是包括人類在內的高等動物生命必需的重要營養素。維生素D主要的生理功能是調節體內鈣、磷代謝并維持血漿鈣、磷水平穩定，參與個體牙齒和骨骼的正常生長發育。維生素D主要包括五種化合物， 分別為維生素D1、D2、D3、D4和D5，家族成員中最重要的是D2和D3，通常所說的維生素D即指這兩種形式。
血清25羥維生素D水平也可作為維生素D營養狀況的客觀指標，維生素D與健康的定量關系研究發展迅速。目前判斷成人維生素D營養狀況的標準為：維生素D缺乏為血清25-(OH) D水平<50nmol/L（1 nmol/L = 0.4 ng/ml）、不足為50～75nmol/L、充足為>75nmol/L。
血清25羥維生素D在調節激素分泌、調節免疫功能、調節細胞增殖和分化等方面的臨床意義。
維生素D過多常由于過量攝入維生素D引起。其臨床表現為疲勞、無力、食欲缺乏、惡心、嘔吐、腹瀉等，嚴重者可有生長發育遲緩、高熱、脫水、癲癇發作等，可引起腎、腦、肺、胰腺等臟器有異位鈣化灶和腎結石。
維生素D作為一種免疫調節劑，既可預防及治療疾病，又不會引起廣泛的免疫抑制作用，并且在動物實驗已經證實其對MS有一定的預防作用。Munger等對美國7萬軍方人員的研究發現，MS患者脫髓鞘的發生與維生素D3水平的季節性波動一致，且口服維生素D3后可減少MS的發生。在一項長達20年，以18.7萬名美國女性為對象的研究發現服用含有維生素D的復合維生素片的人發生MS的比例比不服用維生素片劑的婦女低40%。曬太陽是人類產生維生素D的主要方法，研究人員發現離赤道越遠的地方罹患MS的人數越多。在美國一項大型的研究中也發現，居住在較高緯度地區的婦女，診斷出MS的比例是居住在南方地區婦女的3.5倍。
方法學特點
放免法RIA靈敏度高，特異性強，精密度好，儀器設備條件要求不高，是基層單位對超微量物質測定的主要手段，但存在放射污染的潛在風險。
化學發光法CLIA操作簡單快速， 無同位素污染等 優點，容易自動化。
電化學發光法
ECL 選擇性好、靈敏度高、分析速度快。
LC-MS/MS液相色譜-串聯質譜靈敏度，特異性準確性都高，但操作程序較復雜 需要昂貴的特殊儀器。
色譜法-HPLC靈敏度，特異性，準確性都較高，但設備較貴，標本前處理過程復雜。
酶聯免疫法ELISA
設備和操作簡單，無污染但敏感性和特異性較
差
本文推薦了最先進的分析技術液相色譜串聯質譜法進行測定。
由于測定方法的樣品來自體液血液或尿液，因此樣品前處理是一個技術活。最近ISOLUTE? PLD 除蛋白和磷脂板比傳統的蛋白沉淀技術，ISOLUTE? PLD 大幅改了提取清潔度。
第一步：破碎
第二步：混勻
第三步：洗脫
放大PLD
洗脫目標物
正壓3psi或-2bar真空下約5分鐘，如果樣品含有高顆粒物可以適當增加壓力或真空條件。
萃取后處理
使用Biotage? SPE Dry (40 °C ，40 L/min)或TurboVap? (40°C ，1.0 bar). 空氣或氮氣氣流吹干萃取液。
定容
用100uL30/70甲酸銨（2mM）100μl，0.1%甲酸水/甲醇定容。
UPLC的條件
儀器：Waters Acquity UPLC
質譜的條件
Quattro Premier XE三重四極桿，ESI電噴霧離子源
色譜圖
三分鐘完成25-羥基維生素D2和D3分析，如圖。
回收率
使用血清和處理過的血清，在不同濃度2-00ng/mL下測試，高重現的回收率>70%。如下圖。
PBS/BSA校正曲線
使用PBS/BSA，在不同濃度1-100ng/mL的校正曲線測定25-羥基維生素D2和D3，具有非常好的相關系數，r2 > 0.99。圖略。
Chromsystems 校正曲線
使用已經校正的血清標準（采購自Chromsystems），在0-69ng/mL的濃度下，測定25-羥基維生素D2和D3，具有非常好的相關系數，r2 > 0.99。圖略。
DEQAS外部質量評估方案
本方法最后經5個DEQAS血清樣品萃取測試，一起與Chromsystems校正因子進行優化。DEQAS標準至少80%的結果落在所有實驗室修剪平均的 或-25%以內。圖略。
訂貨信息
貨號：918-0050-P01 ，ISOLUTE? PLD 固定孔板 數量：1個
貨號：121-9600 Biotage VacMaterTM-96 樣品處理歧管 數量：1個
貨號：PPM-96，Biotage PRESSURE 96 正壓歧管，數量：1個
貨號：SD-9600-DHS-EU，Biotage? SPE Dry樣品濃縮系統220/240V 數量：1個
貨號：C103264，TurboVap 96樣品蒸發儀220/240V 數量：1個
本文來自：Application Note AN842.V.1：Extraction of 25-hydroxy Vitamin D from Serum Using ISOLUTE? PLD Prior to LC-MS/MS Analysis
VA和VE的測定
2分鐘固萃5分鐘質譜分析，24小時竟然......關于綠綿科技
北京綠綿科技有限公司(簡稱：綠綿科技)以體現客戶服務最高價值為宗旨，以專業精神和技能為廣大實驗室分析工作者提供樣品前處理、樣品制備及分析、實驗數據精確分析和管理的全面解決方案，致力于協助客戶提高分析檢測的效率和水平。主要代理產品：LabOS實驗室運營系統、Lumtech半制備/制備液相色譜、MassWorks準確質量測定及分子式識別、New Objective納噴離子源、GE生命科學設備、凝膠凈化前處理、在線固相萃取、濃縮儀、氮吹儀、電噴霧離子遷移譜、全柱成像毛細管等電聚焦電泳儀、實驗室氮氣氫氣空氣發生器、Agilent中端氣相液相、生物耗材、Buffer緩沖液、固相萃取耗材。
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