牛年大吉
腺相關(guān)病毒（adeno-associated virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成員之一，是一類無法自主復(fù)制、無被膜的二十面體微小病毒，其直徑約20-26nm，含有4.7kb左右的線狀單鏈DNA作為基因組。研究中采用的重組腺相關(guān)病毒載體（Recombination adeno-associated virus, rAAV）是在非致病的野生型AAV基礎(chǔ)上改造而成的基因載體，由于其種類多樣、免疫原性極低、安全性高、宿主細(xì)胞范圍廣（對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力）、擴(kuò)散能力強(qiáng)、體內(nèi)表達(dá)基因時(shí)間長等，rAAV被視為最有前途的基因研究和基因治療載體之一。
下面就AAV血清型選擇、病毒注射技術(shù)及用量等方面來分享，請跟隨我們的腳步走起。
新
年
快
樂
一.AAV血清型選擇
AAV2是最早被克隆的病毒，也是迄今研究最為徹底、應(yīng)用最為廣泛的病毒載體。現(xiàn)在研究中常用的rAAV就是利用AAV2型基因組與不同的衣殼蛋白結(jié)合產(chǎn)生的混合體病毒載體，一般標(biāo)記為rAAV2/N (N為不同的衣殼血清型)。重組的病毒具有AAV2型的穩(wěn)定表達(dá)和基因整合能力，同時(shí)獲得了不同血清型的組織感染嗜親性，表現(xiàn)出一定的器官靶向特異性。
在動物研究過程中，如果無法確定血清型的選擇，可以嘗試和元生物的Pandora’s Virus （rAAV試用裝）進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，通過比較不同血清型對目標(biāo)組織的感染效果，摸索最佳實(shí)驗(yàn)條件（注射方法、注射位點(diǎn)、病毒用量等），解決病毒載體選擇的煩惱，得到更理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
二.病毒注射技術(shù)及注射量
動物疾病模型是具有人類疾病模擬性表現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)對象和材料，它是探索人類疾病本質(zhì)及新藥有效性評價(jià)的一個(gè)重要方法和手段。
在我們進(jìn)行動物疾病模型構(gòu)建的基礎(chǔ)研究過程中，往往需要借助注射技術(shù)，將藥物、病毒載體、熒光染料等注射到動物體內(nèi)，以構(gòu)建動物模型，亦或是研究其作用機(jī)制及代謝途徑等，來觀察疾病發(fā)生發(fā)展規(guī)律，研究防治措施。
下面就與大家分享幾種常用的動物注射技術(shù)。
尾靜脈注射技術(shù)
尾靜脈注射因其操作技術(shù)簡單，是最常見的一種動物注射技術(shù)手段之一。通過尾靜脈注射，將一定滴度和體積的rAAV病毒載體注射到動物體內(nèi)，目的基因?qū)⒌靡员磉_(dá)。
操作步驟
1.使用小鼠固定器，酒精棉擦拭小鼠尾部，尾靜脈肉眼清晰可見。
2.距尾尖1/3處小于30度角度進(jìn)針后見回血，立即注射。
3.如無阻力，表示針頭已進(jìn)入靜脈，可繼續(xù)注入。
4.注射完畢后，用干棉球按壓傷口3-5min。
注意事項(xiàng)
1.進(jìn)針深度為針頭2/3。
2.注射時(shí)如遇阻力，出現(xiàn)白色皮丘，需要在上方1cm處再次注射。
3.平緩注射，不可注射含有空氣的液體。
4.循環(huán)途徑：直接進(jìn)入血液循環(huán)。
5.參考給藥量：0.005-0.01ml/g（小鼠）。
和元和元生物尾靜脈注射感染組織臟器實(shí)例
局部定點(diǎn)注射技術(shù)
脂肪注射操作步驟：
1.用5%的水合氯醛將動物麻醉，去除腹部的腹股溝處毛發(fā)，并用75%酒精擦拭消毒。
2.在腹股溝處，用眼科鑷將腹股溝處的皮膚輕輕提起，用胰島素針從提起的皮膚與腹部之間處入針，進(jìn)針方向?yàn)檠刂共窟M(jìn)針。
3.固定注射器位置，輕輕推入。
4.將注射器緩緩抽出。
和元生物—rAAV2/8腹股溝脂肪多點(diǎn)注射感染脂肪實(shí)例
肌肉注射操作步驟：
1.抓取小鼠，使其注射部位正對實(shí)驗(yàn)人員。
2.將針頭垂直迅速刺入外側(cè)肌肉。
3.回抽針?biāo)ㄈ鐭o回血，將藥物注入。
4.注射完畢后，用干棉球按壓傷口3-5min。
注意事項(xiàng)
1.進(jìn)針深度為針頭2/3，肌肉注射的時(shí)候傾斜30度角注射。
2.一般選肌肉發(fā)達(dá)，無大血管通過的部位，多選臀及大腿部位。
3.藥物水溶液吸收十分迅速，適用于油溶液和某些刺激性物質(zhì)。
4.循環(huán)途徑：直接進(jìn)入血液循環(huán)。
5.參考給藥量：50~100ul（小鼠）
和元生物—rAAV2/8后腿肌肉多點(diǎn)注射感染肌肉實(shí)例
腹腔注射操作步驟：
1.抓取小鼠，使其腹部朝上頭部略向下垂。
2.抓緊背部皮膚使腹部皮膚緊繃，于腹腔下邊緣位置（左/右側(cè)）進(jìn)針。
3.針頭沿皮下向前推進(jìn)2-3cm，針頭與皮膚呈45°角刺入腹膜。
4.回抽無回流物，緩慢推入藥物
注意事項(xiàng)
1.防止刺傷腸道、膀胱或其它內(nèi)臟器官。
2.腹腔注射宜用等滲藥液，不宜刺激性藥液
3.循環(huán)途徑：腸系膜上靜脈→肝門靜脈→肝→肝靜脈→下腔靜脈→進(jìn)入血液循環(huán)
4.參考給藥量：0.01-0.02ml/g（小鼠）
和元生物—rAAV2/PAN腹腔注射感染胰腺實(shí)例
END
