德國(guó)維潤(rùn)賽潤(rùn)酶聯(lián)免疫法抗體定量檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明（中文版、文字版）
本實(shí)驗(yàn)室用的德國(guó)進(jìn)口維潤(rùn)賽潤(rùn)抗體檢測(cè)試劑盒準(zhǔn)確率很不錯(cuò)，現(xiàn)將單純皰疹病毒1/2型IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說(shuō)明書(shū)的中文、文字版本貼于此處，供大家查閱使用。
產(chǎn)品注冊(cè)證號(hào)：3400298 賽潤(rùn)ELISA classic
單純皰疹病毒1/2型IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說(shuō)明書(shū)
德國(guó)維潤(rùn)賽潤(rùn)研發(fā)有限公司北京代表處
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單純皰疹病毒1/2型 IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說(shuō)明書(shū)
賽潤(rùn) ELISA classic
目錄
1.名稱
2.用途
3.診斷意義
4.說(shuō)明
5.賽潤(rùn) ELISA classic - 檢測(cè)原理
6.試劑盒組成
7..檢測(cè)所需物質(zhì)，試劑盒未提供
8.儲(chǔ)存和穩(wěn)定性
9.賽潤(rùn) ELISA classic的檢驗(yàn)步驟
9.1注意事項(xiàng)
9.2樣品準(zhǔn)備和儲(chǔ)存
9.3試劑盒反應(yīng)試劑的準(zhǔn)備
9.4檢測(cè)程序概要
9.5檢測(cè)過(guò)程
10.檢測(cè)結(jié)果評(píng)估
10.1 4PL單點(diǎn)定量法
10.2檢驗(yàn)有效性標(biāo)準(zhǔn)
10.3計(jì)算賽潤(rùn) ELISA classic單純皰疹病毒1/2型 IgG（定量）
10.4檢測(cè)結(jié)果分析
11.性能特性
11.1重復(fù)性
11.2 敏感性和特異性
12.有效期
13.警告
13.1警告和安全措施
13.2廢料處理
14.參考文獻(xiàn)
15.制造商名稱、地址及聯(lián)系方式
單純皰疹病毒1/2型IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
賽潤(rùn) ELISA classic
酶聯(lián)免疫法測(cè)定人體抗體IgM
- 只限用于體外診斷-
1. 名稱
通用名：?jiǎn)渭儼捳畈《?/2型IgG 試劑盒(定量)
英文名：Herpes simplex Virus 1/2 IgG (quant.)
商品名：賽潤(rùn) ELISA classic單純皰疹病毒1/2型IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
漢語(yǔ)拼音：Serion ELISA classic danchun paozhen 1/2xing IgG kangti dingliang jiance shijihe (meilian mianyifa)
產(chǎn)品編號(hào): ESR105G
檢測(cè)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn): Dade Behring BEP ? III / BEP ? 2000, DSX, 手動(dòng)操作
2.用途
用于定量檢測(cè)人血清或血漿中產(chǎn)生的對(duì)抗單純皰疹病毒1/2型IgG的抗體。
3.診斷意義
賽潤(rùn)ELISA classic 單純皰疹病毒1/2型 IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒主要用于定量檢測(cè)人血清或血漿中產(chǎn)生的抗單純皰疹病毒IgG的抗體。IgM-ELISA試劑可用于檢測(cè)急性感染，而單純皰疹病毒1/2型IgG-ELISA試劑用于確定免疫狀態(tài)以及在腦脊液檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)鞘內(nèi)所形成的抗體。HSV1型IgG和HSV2型IgG試劑可以區(qū)分人類(lèi)抗單純皰疹病毒1型和2型，HSV1/2型IgA-ELISA試劑則尤其可用于識(shí)別復(fù)發(fā)感染。
單純皰疹病毒1型和2型是一種致病性的DNA病毒，屬于皰疹病毒科。
皰疹病毒已在全球范圍內(nèi)傳播。在工業(yè)化國(guó)家，10-20歲的人群中皰疹病毒感染的血清檢出率高達(dá)50%，甚至在90%成年人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了單純皰疹病毒的血清型1，10-15%有單純皰疹病毒的血清型2。
初期感染主要是因?yàn)榕c感染病人接觸（包括唾液或生殖器分泌物）、及通過(guò)輸血或移植手術(shù)造成的交叉感染或醫(yī)源性感染。初期感染后病毒會(huì)終生寄生在局部的神經(jīng)節(jié)中，并可被激活。在分娩期間，生殖器皰疹的傳播過(guò)程沒(méi)有明顯的臨床癥狀，但多數(shù)情況下將會(huì)導(dǎo)致局部或擴(kuò)散型膿毒類(lèi)癥狀。
初期感染后，病毒會(huì)以一種特定的天花板格形（潛伏期）持續(xù)存在直至再激活（冬眠期）。病毒的再激活對(duì)免疫力正常的人來(lái)說(shuō)沒(méi)有明顯的臨床癥狀，而對(duì)免疫能力低下的人則會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床并發(fā)癥。
潛伏期在2-12天之間，傳染性會(huì)持續(xù)至皮膚或粘膜出現(xiàn)皰疹(約3周時(shí)間)或內(nèi)源性感染復(fù)發(fā)期。1型單純皰疹病毒的初期感染90%沒(méi)有明顯的癥狀，有10%左右的病人會(huì)在唇、口或眼角膜及結(jié)膜部位出現(xiàn)特征性的皰疹。
這些膿皰性皰疹會(huì)在有濕疹的皮膚上擴(kuò)散，并可能會(huì)危及生命。進(jìn)一步的并發(fā)癥是大腦炎 (70 % 是致命性的)或腦膜炎。12 % 的2型單純皰疹病毒初期感染會(huì)出現(xiàn)突然性流產(chǎn)、外陰陰道炎或陰莖陰囊皮疹。
盡管多數(shù)生殖器的皰疹病毒感染是由2型單純皰疹病毒引起的，但1型單純皰疹病毒引起的感染也有20%。感染初期的癥狀是相同的，但生殖器感染1型單純皰疹病毒后的再激活機(jī)率明顯比2型低。2型單純皰疹病毒對(duì)生殖器感染是1型的4倍，流行更廣且具有顯著的臨床癥狀，而1型單純皰疹病毒生殖器感染的臨床復(fù)發(fā)率通常是很低的。2型單純皰疹病毒生殖器感染可用抑制病毒復(fù)制的抗病毒藥物治療如阿昔洛韋、纈昔洛韋和泛昔洛韋，單純皰疹病毒1型和2型的血清學(xué)及病毒學(xué)差異能夠指導(dǎo)對(duì)疾病的正確預(yù)后和治療。
賽潤(rùn)ELISA classic HSV1型試劑盒的微孔板由重新聯(lián)合的1型病毒醣蛋白gG1包被，而賽潤(rùn)ELISA classic HSV2型試劑盒的微孔板由全病毒純化而得的醣蛋白gG2包被。使用HSV1型和HSV2型的包膜蛋白gG1和gG2可實(shí)現(xiàn)HSV1型和HSV2型的類(lèi)型特異性抗體應(yīng)答的甄別。
賽潤(rùn)ELISA classic HSV1/2型IgG/IgM/IgA試劑盒的微孔板由這兩種純化的全病毒抗原的混合物包被。賽潤(rùn)ELISA classic HSV1型IgM和HSV2型IgM的微孔板是由相應(yīng)的全病毒抗原包被，可保證直接、敏感地發(fā)現(xiàn)急性感染，因?yàn)榭辊钡鞍譯G1和gG2的抗體很多時(shí)候在初次感染2-3個(gè)月后才能被檢測(cè)到。由于兩種病毒類(lèi)型的交叉反應(yīng)，在使用HSV1型IgM和HSV2型IgM ELISA試劑時(shí)，考慮到個(gè)體免疫狀態(tài)，只有在做平行測(cè)試的情況下才能為區(qū)分病毒特異性抗體應(yīng)答提供證據(jù)。（患者標(biāo)本）在SERION ELISA classic HSV 1型IgM檢測(cè)時(shí)比在SERION ELISA classic HSV 2型IgM檢測(cè)時(shí)得出明顯更高的抗體滴度則表示急性初次感染或者HSV1型病毒復(fù)發(fā)感染。反之，（患者標(biāo)本）在SERION ELISA classic HSV 2型IgM檢測(cè)時(shí)比在SERION ELISA classic HSV 1型IgM檢測(cè)時(shí)得出明顯更高的抗體滴度則表示急性初次感染或者HSV2型病毒復(fù)發(fā)感染。
4. 說(shuō)明
本說(shuō)明書(shū)除單純皰疹病毒1/2型IgG抗體定量檢測(cè)的內(nèi)容外，還涉及到IgM/IgA抗體的定量檢測(cè)，以及對(duì)結(jié)果的分析等。
5. 賽潤(rùn)ELISA classic - 檢驗(yàn)原理
用抗原包被微量板孔，制成固相載體。加患者血清到板孔中，其所含的抗體特異性地與固相載體中存在的抗原結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。除去多余物質(zhì)后，加入堿性磷酸酶標(biāo)記的IgG、IgA和IgM抗體，使之與上述免疫復(fù)合物反應(yīng)。洗板，除去多余的結(jié)合物，加入底物（對(duì)硝基苯磷酸鹽）。其與酶結(jié)合的免疫復(fù)合物反應(yīng)，產(chǎn)生有顏色產(chǎn)物，顏色強(qiáng)度與特異性抗體含量成正比。
6. 試劑盒的組成
試驗(yàn)成分
IgG試劑盒 IgM試劑盒 IgA試劑盒
數(shù)量 / 劑量
微孔條（此微孔條可以拆下單獨(dú)使用，每條有8孔，共96孔，已經(jīng)包被了抗原）
1個(gè)微孔條框架
包被的抗原為滅活抗原
12 12 12
標(biāo)準(zhǔn)血清（立即可用）
人血清溶于含蛋白的磷酸鹽緩沖液；抗HIV抗體、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗體均為陰性；
防腐劑：< 0.1% 疊氮化鈉
染色劑：紫紅色O
2×2毫升 2×2毫升 2×2毫升
陰性對(duì)照血清（立即可用）
人血清溶于含蛋白的磷酸鹽緩沖液；抗HIV抗體、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗體均為陰性；
防腐劑：< 0.1% 疊氮化鈉
染色劑：里沙明綠 V
1×2毫升 1×2毫升 1×2毫升
酶標(biāo)記的抗人IgG, IgA, IgM （立即可用）
羊抗人IgG, IgA, IgM（多克隆），標(biāo)記堿性磷酸酶后在蛋白穩(wěn)定劑中儲(chǔ)存
防腐劑: 0.01% 甲基異噻唑啉酮
0.01% 溴化硝基二堊烷
13毫升 13毫升 13毫升
濃縮洗液（可稀釋至1000毫升）
氯化鈉溶液，含吐溫20和30mM Tris
防腐劑：< 0.1% 疊氮化鈉
1×33.3毫升 1×33.3毫升 1×33.3毫升
稀釋緩沖液
磷酸鹽緩沖液，內(nèi)含蛋白和吐溫20
防腐劑：< 0.1% 疊氮化鈉
0.01克/升的溴酚藍(lán)鈉鹽
2×50毫升 2×50毫升 2×50毫升
終止液
1.2N 氫氧化鈉
15毫升 15毫升 15毫升
底物（立即可用）
對(duì)硝基苯磷酸鹽，不含其它溶劑的緩沖液
防腐劑：< 0.1% 疊氮化鈉
（未開(kāi)封瓶子中的底物可能會(huì)輕微變黃，但不會(huì)影響其質(zhì)量）
13毫升 13毫升 13毫升
帶有標(biāo)準(zhǔn)曲線和評(píng)估表的質(zhì)量控制文件
（抗體以IU/毫升或U/毫升計(jì)量）
1 1 1
7. 其它檢測(cè)所需物質(zhì)
- 普通實(shí)驗(yàn)室所需的儀器裝置
- IgM檢測(cè)：另需賽潤(rùn)含對(duì)照抗原的類(lèi)風(fēng)濕因子Rf－吸附劑（Rf－吸附劑／對(duì)照抗原；產(chǎn)品編號(hào)T200/20ml）
- 分光光度計(jì)，波長(zhǎng)405納米，建議參考波長(zhǎng)范圍620納米- 690納米（例如 650納米）
- 37℃溫箱
- 濕盒
- 蒸餾水。
8. 儲(chǔ)存及穩(wěn)定性
試劑
儲(chǔ)存
穩(wěn)定性
微孔條
(包被抗原)
開(kāi)封后放在2-8℃裝有干燥劑的密封鋁箔袋中。
4星期
陰性對(duì)照 / 標(biāo)準(zhǔn)血清
開(kāi)封后保存于2-8℃。
有效期內(nèi)；
24個(gè)月
酶標(biāo)記抗體
立即可用的溶液于2-8℃儲(chǔ)存。
避免污染（使用無(wú)菌槍尖）。
有效期內(nèi)
28個(gè)月
稀釋緩沖液
開(kāi)啟后于2-8℃儲(chǔ)存。
有絮狀沉淀時(shí)丟掉
未開(kāi)封
24個(gè)月
有效期內(nèi)
36個(gè)月
洗滌液
濃縮液開(kāi)封后保存于2-8℃。
工作液在2-8℃。
工作液在室溫下。
盛過(guò)工作液的瓶子應(yīng)按常規(guī)方法清洗，并丟棄混濁溶液。
有效期內(nèi)
2星期
1星期
底物
2-8℃儲(chǔ)存，避光。
避免污染（使用無(wú)菌槍尖）。當(dāng)溶液變?yōu)辄S色時(shí)應(yīng)予以丟棄（水作空白，吸光度大于0.25時(shí)）。
有效期內(nèi)
24個(gè)月
終止液
開(kāi)封后保存于室溫下。
有效期內(nèi)
9. 賽潤(rùn) ELISA classic的檢驗(yàn)步驟
9.1注意事項(xiàng)
只有全部使用賽潤(rùn) ELISA classic試劑才能保證檢測(cè)效果，因?yàn)樗性噭┒际怯嘘P(guān)聯(lián)的，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。尤其是標(biāo)準(zhǔn)血清，對(duì)照血清以及酶標(biāo)記物，必須使用試劑盒配備的，不要使用其它批號(hào)產(chǎn)品。稀釋緩沖液，洗液，終止液和底物溶液可用于所有賽潤(rùn) ELISA classic試劑盒。
針對(duì)每一個(gè)免疫球蛋白種類(lèi)都有三個(gè)不同的酶標(biāo)記物濃度：低、中、高。
酶標(biāo)記物的分級(jí)通過(guò)以下的標(biāo)志在標(biāo)簽上顯示：
比如： IgG+ 低濃度IgG酶標(biāo)記物
IgG++ 中濃度IgG酶標(biāo)記物
IgG+++ 高濃度IgG酶標(biāo)記物
為了保證我們?cè)噭┖械膽T常質(zhì)量，在極少數(shù)情況下需要使用特殊酶標(biāo)記物。這些試劑盒中的酶標(biāo)記物會(huì)有一個(gè)特殊批號(hào)并且不用“+”標(biāo)志。因此，這些特殊酶標(biāo)記物是不可以和其它酶標(biāo)記物交換使用的。
請(qǐng)您每次都注意標(biāo)簽上的標(biāo)注！
ELISA classic試劑盒內(nèi)所有試劑均必須正確地存放。應(yīng)在未開(kāi)封的情況下，保存于2-8℃，并在有效期（見(jiàn)標(biāo)簽說(shuō)明）內(nèi)使用。詳細(xì)的穩(wěn)定性和儲(chǔ)存資料在“8. 儲(chǔ)存及穩(wěn)定性”內(nèi)將加以詳述。
每一種試劑都是經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)以保證最佳的檢測(cè)結(jié)果。這些試劑如果未經(jīng)規(guī)定被稀釋或改動(dòng)都會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)的敏感性的降低。
在儲(chǔ)存及孵育過(guò)程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，避免試劑受到微生物污染，因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
請(qǐng)從標(biāo)記處剪開(kāi)密封袋。如果鋁袋破損或者已開(kāi)啟裝有干燥劑的鋁袋而未以?shī)A子封緊的，則不要繼續(xù)使用微孔條。
開(kāi)始試驗(yàn)前，將所有試劑置于室溫。
從試劑管中吸取試劑的時(shí)候，應(yīng)注意使用無(wú)菌技術(shù)以防污染。為避免假陽(yáng)性結(jié)果，吸加酶結(jié)合物時(shí)，，吸頭應(yīng)確保不接觸孔壁或噴灑于小孔的外面，注意不要蓋錯(cuò)瓶蓋或管蓋。
試驗(yàn)中試劑的充分混合，對(duì)于檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性至關(guān)重要。在取用對(duì)照品和酶標(biāo)記物之前應(yīng)搖動(dòng)容器使其充分混勻，加樣前，使用單向振動(dòng)器充分混勻稀釋過(guò)的標(biāo)本。
小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 對(duì)照血清，酶結(jié)合物或底物時(shí)，第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果長(zhǎng)，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。
只有嚴(yán)格遵守賽潤(rùn)ELISA classic試劑的試驗(yàn)說(shuō)明才會(huì)得到最佳的檢測(cè)結(jié)果。
如果實(shí)驗(yàn)中未嚴(yán)格遵守質(zhì)量控制認(rèn)證文件上的有效性特異準(zhǔn)則，則試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效。
洗滌不充分將影響試驗(yàn)結(jié)果：
應(yīng)該小心進(jìn)行洗滌。洗滌步驟應(yīng)遵守相關(guān)洗滌器（平底孔，孔直徑7毫米，深10.9毫米）指導(dǎo)手冊(cè)進(jìn)行，所有的孔內(nèi)均應(yīng)加入相同體積的洗滌緩沖液。洗滌結(jié)束時(shí)，應(yīng)將微孔板倒扣于紙巾上并輕輕敲打，以確保所有孔內(nèi)均無(wú)洗滌緩沖液。避免產(chǎn)生泡沫！如果使用自動(dòng)洗板機(jī)，注意正確操作。
9.2檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作和儲(chǔ)存
避免使用高血脂、溶血或黃疸的標(biāo)本，盡管在我們的檢測(cè)中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有副影響。明顯被污染的標(biāo)本（血清或血漿）不能用于檢測(cè)。依照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室方法采集血清或血漿標(biāo)本(EDTA、 檸檬酸鹽、 肝素抗凝)
標(biāo)本不應(yīng)加熱滅活。
9.2.1樣品準(zhǔn)備
賽潤(rùn) ELISA classic 單純皰疹病毒 IgG/IgA
開(kāi)始試驗(yàn)前，患者的待測(cè)樣品必須以稀釋緩沖液稀釋如下（V1+V2）：
V1+V2=1+100 加 10微升 患者待測(cè)樣品
于 1000微升 稀釋緩沖液
稀釋后及加入微孔板前，樣品必須充分混勻。
類(lèi)風(fēng)濕因子的干擾的排除
類(lèi)風(fēng)濕因子抗體是IgM型的自身抗體，可與IgG免疫復(fù)合物結(jié)合。非特異性類(lèi)風(fēng)濕因子抗體的存在將導(dǎo)致IgM檢測(cè)的假陽(yáng)性結(jié)果。另外，也存在弱結(jié)合的病原體特異性IgM抗體被強(qiáng)結(jié)合的IgG抗體取代的可能性。在這種情況下，IgM的檢測(cè)將得到假陰性的結(jié)果。因此，在進(jìn)行IgM檢測(cè)前應(yīng)用類(lèi)風(fēng)濕因子吸附劑對(duì)血清作預(yù)處理。
特別類(lèi)風(fēng)濕因子Rf—吸附劑（產(chǎn)品編號(hào)T200,20ml）不僅包含抗人IgG抗體，還含有一定量的對(duì)照抗原。對(duì)照抗原同時(shí)能與類(lèi)風(fēng)濕因子及可識(shí)別宿主細(xì)胞膜成份的抗體結(jié)合。因此，無(wú)須再進(jìn)行微量孔包被對(duì)照抗原的平行試驗(yàn)。
在進(jìn)行以下SERION ELISA classic IgM檢測(cè)時(shí)，此類(lèi)RF—吸附劑需作為附加試劑另行購(gòu)買(mǎi)：
巨細(xì)胞，單純皰疹病毒，麻疹，腮腺炎，風(fēng)疹病毒，剛地弓形蟲(chóng)，帶狀皰疹病毒
首先應(yīng)該使用稀釋緩沖液(V2)對(duì)類(lèi)風(fēng)濕因子吸附劑(Rf-吸附劑/對(duì)照抗原)(V1)進(jìn)行如下稀釋?zhuān)?div style="height:15px;">
V1+V2=1+4 加 200微升 Rf-吸附劑/對(duì)照抗原
于 800微升 稀釋緩沖液中
然后將患者的待測(cè)樣品(V1)在此Rf-稀釋緩沖液(V3)中進(jìn)行稀釋?zhuān)?div style="height:15px;">
V1+V3=1+100 加 10微升 患者待測(cè)樣品
于 1000微升 Rf-稀釋緩沖液中
9.2.2樣品儲(chǔ)存
密封的患者樣品可在冰箱中2-8℃保存7天。≤ -20℃可保存更久。
避免樣品反復(fù)凍融。
已稀釋的樣品可在2-8 ℃保存一星期。
9.3 試劑盒反應(yīng)試劑的準(zhǔn)備工作
9.3.1 微孔條
微孔條排列于板中，并與干燥劑一同封于鋁袋內(nèi)。未使用的微孔條重新放入鋁袋，密封好，確保鋁袋的密封性。
7.3.2 對(duì)照血清 / 標(biāo)準(zhǔn)血清
對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)血清可直接使用，不必進(jìn)一步稀釋
每次試驗(yàn)或是試驗(yàn)體系，無(wú)論檢測(cè)用的微孔板數(shù)目多少，均應(yīng)包括空白對(duì)照孔，陰性對(duì)照孔和標(biāo)準(zhǔn)血清孔，且標(biāo)準(zhǔn)血清應(yīng)加兩孔。
不要用RF吸附劑處理對(duì)照血清！
9.3.3 抗人 IgG、IgA或IgM抗體，用 AP標(biāo)記（備用）
禁止將不同試劑盒的酶標(biāo)抗體混合使用。同一試劑盒才能達(dá)到最佳檢測(cè)效果。
為了避免酶標(biāo)記物的污染（請(qǐng)使用時(shí)先一次性取出實(shí)驗(yàn)所需量置于一容器中，避免反復(fù)從試劑瓶中吸取試劑。）
9.3.4 洗液
以1：30稀釋濃縮洗滌緩沖液（V1）至終體積V2。
例如：
濃縮緩沖液（V1）
終體積（V2）
33.3毫升
1000毫升
1.0毫升
30毫升
9.3.5 樣品的稀釋緩沖液（即用）
9.3.6 底物（即用）
試驗(yàn)時(shí)戴手套以避免污染。必須以無(wú)菌槍尖吸取底物溶液。
9.3.7 終止液（即用）
9.4 檢測(cè)程序概要
單純皰疹病毒 1/2型
IgG/IgA/IgM定量
進(jìn)行IgM檢測(cè)時(shí)先用類(lèi)風(fēng)濕因子吸附劑預(yù)處理血清
室溫孵育15分鐘或4℃過(guò)夜
樣品稀釋液（病人血清）
1+100
ˉ
將稀釋的樣本，和立即可用的對(duì)照血清 / 標(biāo)準(zhǔn)血清，加
到微量孔內(nèi)（100微升）
ˉ
孵育60分鐘 / 37℃
濕盒中
ˉ
洗滌
ˉ
加入立即可用的酶標(biāo)記抗體溶液（100微升）
ˉ
再孵育30分鐘 / 37℃
濕盒中
ˉ
洗滌
ˉ
加入底物溶液（100微升）
ˉ
再孵育30分鐘 / 37℃
濕盒中
ˉ
加入終止液（100微升）
ˉ
在405 納米處讀數(shù)
9.5 檢測(cè)過(guò)程
9.5.1 將檢測(cè)所需數(shù)目的微孔條放到微孔板框上并準(zhǔn)備好一張草簽。
9.5.2 在微量孔內(nèi)分別加入100微升的已稀釋樣本或立即可用的對(duì)照血清。留一個(gè)孔為底物空白使用，例如：
定量的IgG /IgA/ IgM
微量孔
孔A1
孔B1
孔C1
孔D1
孔E1
底物空白
陰性對(duì)照
標(biāo)準(zhǔn)血清
標(biāo)準(zhǔn)血清
標(biāo)本 1......
9.5.3 將樣品于濕盒內(nèi)37℃（±1℃）孵育60分鐘（±5分鐘)。
9.5.4 孵育后以洗液緩沖液洗滌板孔（使用自動(dòng)洗板機(jī)或手工洗板）：
- 吸去或甩去洗液
- 每孔內(nèi)加入300微升洗液
- 吸去或甩去洗液
- 重付息滌過(guò)程3次（共4次！）
- 將微孔板翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)在紙巾上拍打，使微孔中不再含有液體
9.5.5 加入酶標(biāo)記抗體。
于適當(dāng)孔內(nèi)（底物空白除外）加入100微升 IgG / IgA/IgM酶標(biāo)記抗體
9.5.6 濕盒內(nèi)37℃（±1℃）孵育30分鐘（±1分鐘）*。
9.5.7 孵育后，以洗液清洗板孔（洗滌見(jiàn)上）
9.5.8 加入底物
于每孔內(nèi)加入100微升底物溶液（包括底物空白孔）
9.5.9 濕盒內(nèi)37℃（±1℃）孵育30分鐘（±1分鐘）*。
9.5.10 終止反應(yīng)
每孔內(nèi)加入100微升終止液，輕微振蕩微孔板以混合溶液。
9.5.11 讀取消光度
以底物空白為空白對(duì)照液， 60分鐘內(nèi)讀取405納米的OD值，建議參考波長(zhǎng)范圍為620納米-690納米（例如650納米）。
10．檢測(cè)結(jié)果評(píng)估：
賽潤(rùn) ELISA classic 單純皰疹病毒1/2型lgG/IgA/IgM（定量）
10.1 4PL單點(diǎn)定量法
通過(guò)利用非線性方程，可以保證根據(jù)消光信號(hào)的定量數(shù)值精確計(jì)算出抗體活性，該方程可在不對(duì)OD值進(jìn)行轉(zhuǎn)換的情況下調(diào)整S型曲線。
用賽潤(rùn) ELISA classic試劑檢測(cè)，抗體濃度可通過(guò)邏輯對(duì)數(shù)模型（4PL, 4個(gè)參數(shù)）來(lái)計(jì)算，該模型對(duì)濃度曲線有很精確的適用性。計(jì)算公式如下：
OD = A +
D - A
1 + eB(C-ln conc.)
參數(shù)A、B、C和 D能夠反映曲線的精確形狀。
1. 下端漸進(jìn)線 [ 參數(shù)A
2. 曲線斜率 [ 參數(shù)B
3. 轉(zhuǎn)折點(diǎn) [ 參數(shù)C
4. 上端漸進(jìn)線 [ 參數(shù)D
標(biāo)準(zhǔn)曲線是由德國(guó)維潤(rùn)賽潤(rùn)研發(fā)有限公司（維爾茨堡市）在嚴(yán)格條件下經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)制定的。使用者無(wú)需花費(fèi)大量的時(shí)間和使用昂貴的儀器來(lái)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
每一個(gè)試劑盒內(nèi)均附有專(zhuān)用的標(biāo)準(zhǔn)曲線和評(píng)估表用來(lái)計(jì)算抗體濃度。如有需要也可取得相關(guān)的評(píng)估軟件。
為了校正正常試驗(yàn)偏差和建立試驗(yàn)對(duì)照，每輪試驗(yàn)均需使用標(biāo)準(zhǔn)血清作為對(duì)照。該對(duì)照血清的有效范圍參考值是由廠商的質(zhì)量控制部門(mén)確定的，在此范圍內(nèi)可保證抗體濃度測(cè)定的正確性。標(biāo)準(zhǔn)血清不一定是陽(yáng)性對(duì)照，且在某些ELISA試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)血清數(shù)值可能是臨界值或陰性結(jié)果。
10.2有效性標(biāo)準(zhǔn)
- 底物空白的OD <0.25
- 陰性對(duì)照必須為陰性
- 賽潤(rùn) ELISA classic定量試驗(yàn)：標(biāo)準(zhǔn)血清的平均OD值必須在有效范圍內(nèi)，此范圍在試劑盒的特異性質(zhì)量控制認(rèn)證書(shū)上給定（減去底物空白之后！）
- 賽潤(rùn) ELISA classic定量試驗(yàn)：陽(yáng)性對(duì)照的平均OD值必須在有效范圍內(nèi)，此范圍在試劑盒的特異性質(zhì)量控制認(rèn)證書(shū)上給定（減去底物空白之后！）
- OD值的變化不能超過(guò)20%
如果未達(dá)到以上標(biāo)準(zhǔn)，試驗(yàn)無(wú)效且必須重做。
10.3 賽潤(rùn) ELISA classic單純皰疹病毒1型IgG/IgM的定量計(jì)算
10.3.1 非自動(dòng)評(píng)估
每個(gè)試劑盒內(nèi)均備有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線和一個(gè)評(píng)估表，因而每一個(gè)OD值都可得到一個(gè)抗體活性值。標(biāo)準(zhǔn)血清的參考值和有效范圍已在評(píng)估表格（質(zhì)量控制證書(shū)）中給定。
所有的OD值在求值前必須先減去空白（A1）。
方法1：定性評(píng)估
為確定臨界值范圍，請(qǐng)將已測(cè)得的標(biāo)準(zhǔn)OD平均值與質(zhì)量控制證書(shū)上給出的數(shù)據(jù)相乘（見(jiàn)專(zhuān)用公式），例如：
OD = 0.502 x MW(STD) 臨界值上限
OD = 0.352 x MW(STD) 臨界值下限
如果得到的標(biāo)準(zhǔn)血清的平均消光度值是0.64, 那么臨界值的范圍即為 0.225-0.321。
方法2：利用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行抗體活性的連續(xù)求值。
測(cè)定間差異（指不同時(shí)間的檢測(cè)差異和不同實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)差異）可用校正系數(shù) F 與當(dāng)前測(cè)定數(shù)值相乘進(jìn)行校正。校正系數(shù)F的計(jì)算公式為：
F= =
（標(biāo)準(zhǔn)血清）OD參考值
（標(biāo)準(zhǔn)血清）當(dāng)前測(cè)量OD值
此步驟對(duì)于校正當(dāng)前檢測(cè)與批次標(biāo)準(zhǔn)曲線之間的偏差是非常必要的。
首先，不同日期檢測(cè)之間的差異可通過(guò)計(jì)算校正系數(shù) F 進(jìn)行校正。
1. 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)血清的兩次OD值的平均值，并確認(rèn)是否在有效范圍內(nèi)。
2. 校正系數(shù) “F”的計(jì)算：用給定的參考數(shù)值除以標(biāo)準(zhǔn)血清消光數(shù)的平均值。
F = 標(biāo)準(zhǔn)血清的參考消光數(shù)值 / 標(biāo)準(zhǔn)血清消光數(shù)的平均值
3. 將測(cè)得的所有病人血清的消光數(shù)值與校正系數(shù) “F”相乘。
4. 用經(jīng)過(guò)校正的消光數(shù)值在標(biāo)準(zhǔn)曲線“IU/ml或U/ml”坐標(biāo)軸上確定對(duì)應(yīng)的抗體活性。
賽潤(rùn) ELISA classic 單純皰疹病毒1/2型 IgG/IgA/IgM抗體活性的計(jì)算:
陽(yáng)性結(jié)果: > 30 U/ml
臨界值結(jié)果: 20-30 U/ml
陰性結(jié)果: < 20 U/ml
針對(duì)臨界值結(jié)果的樣品，應(yīng)在1-2 周后對(duì)相應(yīng)的病人再進(jìn)行取樣，重新檢測(cè)。
10.3.2 利用SERION easy base 4PL軟件/SERION 評(píng)估軟件進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)
輸入四個(gè)參數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)血清參考值之后，聯(lián)機(jī)軟件就會(huì)計(jì)算出抗體活性。
如果標(biāo)準(zhǔn)血清的消光值超出有效范圍，SERION easy base 4PL軟件就會(huì)顯示如下信息：
“標(biāo)準(zhǔn)已超出允許范圍”和 / 或“標(biāo)準(zhǔn)差異大于20%”。
SERION 評(píng)估軟件只用英語(yǔ)顯示：
?Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24. Standard value differ more than 20% in following groups: Group 1-24.” （“以下組樣品標(biāo)準(zhǔn)值超出范圍：組1-24。以下組樣品標(biāo)準(zhǔn)值差異大于20%：組1-24。”）
在這種情況下，此輪試驗(yàn)無(wú)效，需重做。
只有更換批號(hào)時(shí)，參數(shù)和參數(shù)值才需要改變（評(píng)估表中標(biāo)有參數(shù)與參考值）。組別特異性數(shù)據(jù)的正確輸入與否可以以標(biāo)準(zhǔn)血清的 IU / ml 或 U / ml 值為基礎(chǔ)進(jìn)行檢驗(yàn)。計(jì)算出的平均單位值需與組別特異性認(rèn)證書(shū)所示的單位值相對(duì)應(yīng)。可自動(dòng)校正測(cè)定值。使用標(biāo)準(zhǔn)版本打印機(jī)會(huì)顯示如下內(nèi)容：
樣品編號(hào)
OD值
IU / ml或 U / ml
結(jié)果說(shuō)明
10.4 檢測(cè)結(jié)果分析
在1型或2型單純皰疹病毒初期感染發(fā)病后，一般可檢測(cè)到抗體的存在。IgM抗體和 IgG抗體的血清轉(zhuǎn)化都能說(shuō)明是處于初期感染階段，同時(shí)也可檢測(cè)到IgA抗體，IgM、IgA抗體和IgG的血清轉(zhuǎn)化可平行出現(xiàn)。IgM、IgA抗體在幾周或幾個(gè)月后的后期感染中會(huì)消失，這時(shí)很少能檢測(cè)到它們的存在。而病毒特異性的IgG抗體會(huì)終生在機(jī)體內(nèi)存在，只有極少數(shù)例外（見(jiàn)圖 la）。
病毒的再感染和病毒在體內(nèi)再激活則表現(xiàn)出不同的血清學(xué)特征（見(jiàn)圖 lb），對(duì)一個(gè)病人相差7-10天的兩份血樣進(jìn)行檢測(cè)可發(fā)現(xiàn)IgG濃度明顯的上升趨勢(shì)，而另一個(gè)病毒特異性IgM抗體則很少被檢測(cè)到。與初期感染相比，IgA的第二次血清轉(zhuǎn)化和IgG抗體濃度的增加都是單純皰疹病毒在體內(nèi)再激活的血清學(xué)標(biāo)志。
圖 la
圖 lb
對(duì)于ELISA試驗(yàn)結(jié)果的說(shuō)明應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：
? 單純皰疹病毒初次感染后，在幾個(gè)月后仍能檢測(cè)到部分IgM抗體持續(xù)存在。
? 檢測(cè)到單純皰疹病毒IgM抗體可能是由于出現(xiàn)其它皰疹病毒屬（如水痘-帶狀皰疹病毒，巨細(xì)胞病毒和EB病毒）而發(fā)生交叉感應(yīng)所造成的。
? 計(jì)算得出高 IgG 抗體滴度不能提供支持臨床表現(xiàn)的證據(jù)。血清陽(yáng)性健康人和病人的IgG抗體濃度在較大范圍內(nèi)重疊，基于這一事實(shí)，單個(gè)血清樣品IgG抗體濃度的測(cè)定不能為疾病狀態(tài)提供診斷依據(jù)。對(duì)于可疑感染的人有必要檢測(cè)血清對(duì)的滴度升高情況。
對(duì)不同血清學(xué)狀態(tài)的分析
HSV IgM
HSV IgG
HSV IgA
說(shuō)明
-
-
-
血清反應(yīng)陰性狀態(tài)
+
+
+
-
+/-
+
抗HSV IgA抗體可能存在，也可能還缺失。
急性初期感染
-
+
-
繼往感染、血清反應(yīng)陽(yáng)性狀態(tài)、病毒潛伏期
+/-
+
+
病毒再激活時(shí)的血清學(xué)狀態(tài)
11. 性能特征
11.1重復(fù)性
檢測(cè)內(nèi)結(jié)果的重復(fù)性通過(guò)在同一批試驗(yàn)中檢測(cè)20次不同反應(yīng)的血清來(lái)判斷，而檢測(cè)間結(jié)果的重復(fù)性通過(guò)分別在5天進(jìn)行10次獨(dú)立的血清檢測(cè)分析來(lái)判斷。
變異系數(shù) (CV) =
標(biāo)準(zhǔn)差
× 100
平均值
賽潤(rùn) ELISA classic 單純皰疹病毒1 IgG:
平均消光值 (OD)
檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)
平均消光值 (OD)
檢測(cè)間分析(CV%)
樣品
弱陽(yáng)性
陽(yáng)性
強(qiáng)陽(yáng)性
0.371
0.897
1.894
5.70
3.50
1.30
0.358
0.904
1.835
4.30
5.10
2.50
賽潤(rùn) ELISA classic 單純皰疹病毒1 IgM:
平均消光值 (OD)
檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)
平均消光值 (OD)
檢測(cè)間分析(CV%)
樣品
弱陽(yáng)性
0,448
3,9
0,467
9,2
陽(yáng)性
0,940
3,0
0,918
10,5
強(qiáng)陽(yáng)
1,458
2,1
1,487
11,5
賽潤(rùn) ELISA classic 單純皰疹病毒2 IgG:
平均消光值 (OD)
檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)
平均消光值 (OD)
檢測(cè)間分析(CV%)
樣品
弱陽(yáng)性
陽(yáng)性
強(qiáng)陽(yáng)性
0.348
0.700
1.440
5.10
4.00
3.10
0.428
0.683
1.753
5.20
8.90
3.20
賽潤(rùn) ELISA classic 單純皰疹病毒2 IgM:
平均消光值 (OD)
檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)
平均消光值 (OD)
檢測(cè)間分析(CV%)
樣品
弱陽(yáng)性
0,583
6,4
0,679
6,7
陽(yáng)性
1,081
4,8
1,170
6,4
強(qiáng)陽(yáng)
1,492
2,8
1,787
5,4
賽潤(rùn) ELISA classic 單純皰疹病毒1/2 IgA:
平均消光值 (OD)
檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)
平均消光值 (OD)
檢測(cè)間分析(CV%)
樣品
弱陽(yáng)性
陽(yáng)性
強(qiáng)陽(yáng)性
0.537
0.966
2.453
6.20
710
3.20
0.542
0.920
1.684
9.00
5.80
9.70
賽潤(rùn) ELISA classic 單純皰疹病毒 1/2 IgG:
平均消光值 (OD)
檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)
平均消光值 (OD)
檢測(cè)間分析(CV%)
樣品
弱陽(yáng)性
0,391
2,7
0,435
6,7
陽(yáng)性
1,138
2,2
1,179
3,5
強(qiáng)陽(yáng)
1,773
2,2
1,841
2,3
賽潤(rùn) ELISA classic 單純皰疹病毒 1/2 IgM:
平均消光值 (OD)
檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)
平均消光值 (OD)
檢測(cè)間分析(CV%)
樣品
弱陽(yáng)性
陽(yáng)性
強(qiáng)陽(yáng)性
0.924
1.178
2.272
3.70
2.80
1.90
0.970
1.146
2.077
5.90
6.00
5.80
11.2 敏感性與特異性
HSV 1 IgG: 檢測(cè)97份陽(yáng)性的和54份陰性的獻(xiàn)血者血清，進(jìn)行檢測(cè)內(nèi)分析。用一家在歐洲技術(shù)領(lǐng)先的公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫試劑做對(duì)照。對(duì)照試驗(yàn)中檢測(cè)出97份血清為陽(yáng)性，52份陰性，兩份血清得出臨界值結(jié)果。
HSV 2 IgG：檢測(cè)139份血清，用一家在歐洲技術(shù)領(lǐng)先的公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫試劑做對(duì)照。42份血清在維潤(rùn)ELISA試劑檢測(cè)中呈陽(yáng)性、96份呈陰性，1份臨界值。對(duì)照試劑試驗(yàn)顯示42份被檢測(cè)血清為陽(yáng)性、97份陰性。所檢測(cè)血清中37份為孕婦血清。其中兩份血清為HSV2陽(yáng)性（單純皰疹1型維潤(rùn)和對(duì)照試劑均檢測(cè)出）。
賽潤(rùn) ELISA classic IgG-檢測(cè)
單純皰疹1型
單純皰疹2型
敏感性
98,7 %
100 %
特異性
100 %
100 %
HSV 1/2 IgG: 檢測(cè)111份陽(yáng)性的和51份陰性的獻(xiàn)血者血清，進(jìn)行檢測(cè)內(nèi)分析。用一家在歐洲技術(shù)領(lǐng)先的公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫試劑做對(duì)照。所有陽(yáng)性血清反應(yīng)均為陽(yáng)性。對(duì)照試驗(yàn)中檢測(cè)出97份血清為陽(yáng)性，52份陰性，兩份血清得出臨界值結(jié)果51份在對(duì)照試劑中檢測(cè)為陰性的血清，其中有1份在賽潤(rùn)ELISAclassic HSV1/2型 IgG試劑中反應(yīng)為陽(yáng)性，而將這份血清用一個(gè)由北美一家技術(shù)領(lǐng)先的廠家生產(chǎn)的試劑進(jìn)行檢測(cè)也得出陽(yáng)性。這份血清在計(jì)算特異性時(shí)按照陽(yáng)性考慮。.
HSV 1/2 IgM: 通過(guò)對(duì)50份血清進(jìn)行檢測(cè)內(nèi)分析可以計(jì)算出敏感性，用一家在歐洲技術(shù)領(lǐng)先的公司生產(chǎn)的單純皰疹病毒IgM ELISA對(duì)這50份血清進(jìn)行篩查，結(jié)果均為陽(yáng)性。在使用賽潤(rùn)ELISA單純皰疹病毒IgM檢測(cè)時(shí)，有8份血清反應(yīng)成陰性。另外，在一所專(zhuān)門(mén)的單純皰疹病毒實(shí)驗(yàn)室中利用免疫熒光法對(duì)這8份血清進(jìn)行再次檢測(cè)，其中有5份反應(yīng)結(jié)果為陰性（滴度在1:20至1:40之間，帶有無(wú)細(xì)胞抗體）。在3個(gè)呈陽(yáng)性反應(yīng)的血清中有兩個(gè)是長(zhǎng)期持續(xù)存在的IgM抗體，因此不在考慮之列。參考試驗(yàn)中呈弱陽(yáng)性的血清，在賽潤(rùn)ELISA classic 單純皰疹病毒IgM檢測(cè)中沒(méi)有檢測(cè)出陽(yáng)性。
通過(guò)對(duì)343份健康孕婦血清進(jìn)行檢測(cè)內(nèi)分析可以對(duì)特異性進(jìn)行評(píng)估。在此觀察到：約10%的血清用所建議的（20-30 U/ml）臨界值范圍反應(yīng)為陽(yáng)性或者臨界值結(jié)果。通過(guò)使用提高的臨界值范圍（60-70 U/ml）則陽(yáng)性率降低到不到3%。因?yàn)樵趹言衅陂g病毒在激活出現(xiàn)頻繁，從而導(dǎo)致使用所建議的（20-30 U/ml）臨界值范圍使得所觀察到的陽(yáng)性結(jié)果數(shù)量增加。使用提高后的臨界值范圍（60-70 U/ml）避免了檢測(cè)到再激活，但同時(shí)的不利方面是縮小了檢測(cè)窗口而不能及早地識(shí)別早期感染。
HSV 1/2 IgA: 用單純皰疹病毒 IgA抗體檢測(cè)124份血清，檢測(cè)前已預(yù)知70份為陽(yáng)性，54份為陰性。并使用德國(guó)一所大學(xué)所采用的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)單純皰疹病毒 IgA ELISA作為對(duì)比試驗(yàn)，進(jìn)行外部特性評(píng)估研究。
賽潤(rùn) ELISA classic
單純皰疹病毒 1/2
IgA檢測(cè)
IgG檢測(cè)
IgM檢測(cè)
敏感性
94.3%
100%
98%
特異性
92.6%
100%
98%
12. 有效期
2-8℃貯存，有效期詳見(jiàn)試劑盒包裝，具體各部分有效期在“8.儲(chǔ)存和穩(wěn)定性”中詳述。
13.警告
13.1警告和安全措施
賽潤(rùn) ELISA classic試劑盒是針對(duì)熟悉實(shí)驗(yàn)室操作人員所設(shè)計(jì)使用的。
所有試劑盒試劑及人類(lèi)標(biāo)本必須采用已有的良好實(shí)驗(yàn)技術(shù)，小心處理：
- 此試劑盒內(nèi)含人血成分。盡管所有的對(duì)照及定點(diǎn)對(duì)照都已經(jīng)過(guò)試驗(yàn)驗(yàn)證并且發(fā)現(xiàn)對(duì)于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗體，HIV抗體均為陰性；但仍認(rèn)為它們具有潛在的感染性。
- 移液過(guò)程禁止用口。
- 在處理試劑和標(biāo)本的地方禁止吸煙，飲食。
- 使用試劑盒和標(biāo)本時(shí)，必須戴一次性手套，穿試驗(yàn)服，戴安全鏡。使用后請(qǐng)徹底洗手清潔。
- 患者樣本及其他潛在感染材料試驗(yàn)后應(yīng)予以消毒。
- 試劑應(yīng)保存在安全的地方，禁止兒童接觸。
- 終止液：具有腐蝕性（C）；發(fā)生酸燒傷（R34）；因此在操作時(shí)應(yīng)穿戴防護(hù)鏡，手套和試驗(yàn)服。
13.2廢料處理
請(qǐng)注意相關(guān)要求！
14．參考文獻(xiàn)
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Blackwell Wissenschafts-Verlag GmbH, Berlin (1992) 8: 9-12, 9: 1-7
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simplex-Viren Springer Verlag Internist (1992) 33: 581-585
3.) Bauer, G. Diagnostik der Herpesviren MTA 10 (1995) 7: 587-593
4.) Guglielmino, A. et al. Serum IgA Antibodies in HSV Asymptomatic Genital Infections Journal of Medical Virology (1989) 27: 210-214
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8.）Ashley, R., Wald, A.
Genital Herpes: Review of the Epidemic and Potential Use of Type-Specific Serology
Clinical Microbiology Reviews (1999) 12, 1: 1-8
15. 制造商名稱、地址及聯(lián)系方式
15.1 德國(guó)維潤(rùn)賽潤(rùn)研發(fā)有限公司
弗里德里西-貝爾吉伍斯-里英大街19號(hào) D-97076 維爾茨堡，德國(guó)
